استخلاص الحمض النووي وترحيله
استخلاص الحمض النووي:
يعتمد استخلاص الحمض النووي (DNA) على كسر الغشاء الخلوي والنووي، ثم فصل الحمض النووي عن باقي مكونات الخلية. إليك بعض الخطوات الرئيسية:
تفتيت الخلايا: تُستخدم تقنيات مختلفة لكسر جدران الخلايا، مثل التجميد والذوبان، أو استخدام المنظفات، أو الطحن الميكانيكي.
إزالة البروتينات: تُستخدم إنزيمات مثل البروتياز لتحليل البروتينات، تاركين الحمض النووي سليمًا.
ترسيب الحمض النووي: يُضاف الكحول إلى المحلول، مما يؤدي إلى ترسب الحمض النووي بينما تبقى المكونات الأخرى في المحلول.
تنقية الحمض النووي: تُستخدم تقنيات مختلفة لتنقية الحمض النووي من الملوثات، مثل استخدام أعمدة الطرد المركزي أو التقنيات الكيميائية.
ترحيل الحمض النووي:
بعد استخلاص الحمض النووي، يمكن ترحيله باستخدام تقنية الترحيل الكهربائي على الهلام. إليك بعض الخطوات الرئيسية:
تحضير هلام الأجاروز: يُحضّر هلام الأجاروز في محلول يحتوي على أيونات، مثل Tris-borate-EDTA (TBE).
تحميل عينات الحمض النووي: تُمزج عينات الحمض النووي مع محلول تحميل يحتوي على صبغة ملونة.
وضع عينات الحمض النووي على الهلام: تُوضع عينات الحمض النووي في آبار مُشكلة في هلام الأجاروز.
تشغيل التيار الكهربائي: يُطبق تيار كهربائي على الهلام، مما يؤدي إلى هجرة جزيئات الحمض النووي عبر الهلام.
تصور الحمض النووي: تُستخدم الأشعة فوق البنفسجية لتصور الحمض النووي الملطخ.
عوامل تؤثر على ترحيل الحمض النووي:
حجم جزيء الحمض النووي: تتحرك جزيئات الحمض النووي الصغيرة بشكل أسرع من جزيئات الحمض النووي الكبيرة.
تركيز الهلام: يُستخدم هلام الأجاروز بتركيزات مختلفة اعتمادًا على حجم جزيء الحمض النووي.
الجهد الكهربائي: يُستخدم جهد كهربائي مختلف اعتمادًا على حجم جزيء الحمض النووي وتركيز الهلام.
ملاحظة: هذه نظرة عامة على كيفية استخلاص الحمض النووي وترحيله. تختلف التقنيات المحددة المستخدمة اعتمادًا على نوع العينة والهدف من التحليل.
